ความเข้มข้นของ DNA คำนวณโดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์อย่างไร

2024 ผู้เขียน: Miles Stephen | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-15 23:41

ความเข้มข้นของดีเอ็นเอ เป็น ประมาณโดย วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 260nm ปรับ A₂₆₀ การวัดความขุ่น ( วัดโดย การดูดกลืนแสงที่ 320 นาโนเมตร) คูณ โดย ปัจจัยการเจือจางและ โดยใช้ ความสัมพันธ์ที่ A₂₆₀ เท่ากับ 1.0 = 50ไมโครกรัม/มิลลิลิตร dsDNA บริสุทธิ์

ผู้คนยังถามอีกว่า คุณค้นพบความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของ DNA ได้อย่างไร?

เพื่อประเมิน ความบริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ , วัดค่าการดูดกลืนแสงตั้งแต่ 230 นาโนเมตร ถึง 320 นาโนเมตร เพื่อตรวจหาสารปนเปื้อนอื่นๆ ที่อาจเป็นไปได้ ที่พบมากที่สุด การคำนวณความบริสุทธิ์ คืออัตราส่วนของการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตร หารด้วยค่าที่อ่านได้ที่ 280 นาโนเมตร อย่างดี ดีเอ็นเอ จะมี A₂₆₀/NS₂₈₀ อัตราส่วน 1.7–2.0

ในทำนองเดียวกันความเข้มข้นของ DNA ที่ดีคืออะไร? NS ดี คุณภาพ ดีเอ็นเอ ตัวอย่างควรมี A₂₆₀/NS₂₈₀ อัตราส่วน 1.7-2.0 และ A₂₆₀/NS₂₃₀ อัตราส่วนที่มากกว่า 1.5 แต่เนื่องจากความไวของเทคนิคต่างๆ ต่อสารปนเปื้อนเหล่านี้แตกต่างกันไป ค่าเหล่านี้จึงควรใช้เพื่อเป็นแนวทางในความบริสุทธิ์ของตัวอย่างของคุณเท่านั้น

เกี่ยวกับเรื่องนี้ NanoDrop คำนวณความเข้มข้นของ DNA อย่างไร

คุณคูณค่าการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรด้วยปัจจัยคงที่ (เท่ากับ 50 สำหรับ ดีเอ็นเอ ) และคุณจะได้รับ ความเข้มข้นของดีเอ็นเอ . โวล่า. (ตกลงในทางเทคนิคคือ A260 ของตัวอย่างหนา 10 มม. ที่คูณด้วย 50; นาโนดรอป แสดง A260 ราวกับว่าตัวอย่างมีความหนา 10 มม. เช่นเดียวกับในคิวเวตต์มาตรฐาน)

เหตุใดเราจึงต้องใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์เพื่อหาปริมาณ DNA ของเรา

NS สเปกโตรโฟโตมิเตอร์คือ สามารถกำหนดความเข้มข้นเฉลี่ยของกรดนิวคลีอิกได้ ดีเอ็นเอ หรืออาร์เอ็นเอที่มีอยู่ในส่วนผสมเช่นเดียวกับความบริสุทธิ์ โดยใช้ กฎหมายเบียร์–แลมเบิร์ตมัน เป็น สามารถเชื่อมโยงปริมาณของแสงที่ดูดซับกับความเข้มข้นของโมเลกุลที่ดูดซับได้