สารบัญ:

คุณหาความเข้มข้นของ DNA จากการดูดกลืนแสงได้อย่างไร?
คุณหาความเข้มข้นของ DNA จากการดูดกลืนแสงได้อย่างไร?

วีดีโอ: คุณหาความเข้มข้นของ DNA จากการดูดกลืนแสงได้อย่างไร?

วีดีโอ: คุณหาความเข้มข้นของ DNA จากการดูดกลืนแสงได้อย่างไร?
วีดีโอ: Lab 4. Spectrophotometry สเปกโตรโฟโตเมตรี ชีวเคมีลาดกระบัง 2024, ธันวาคม
Anonim

ความเข้มข้นของดีเอ็นเอ ประมาณโดยการวัดค่า การดูดซับ ที่ 260nm ปรับ A260 การวัดความขุ่น (วัดโดย การดูดซับ ที่ 320nm) คูณด้วยตัวคูณการเจือจาง และใช้ความสัมพันธ์ที่ A260 เท่ากับ 1.0 = 50ไมโครกรัม/มิลลิลิตร dsDNA บริสุทธิ์

เช่นเดียวกัน มีคนถามว่า คุณหาความเข้มข้นของ DNA ได้อย่างไร?

ในการกำหนดความเข้มข้นของ DNA ในตัวอย่างดั้งเดิม ให้ทำการคำนวณต่อไปนี้:

  1. ความเข้มข้นของ dsDNA = 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร × OD260 × ปัจจัยการเจือจาง
  2. ความเข้มข้นของ dsDNA = 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร × 0.65 × 50
  3. ความเข้มข้นของ dsDNA = 1.63 มก./มล.

นอกจากนี้ความเข้มข้นของ DNA ที่ดีคืออะไร? NS ดี คุณภาพ ดีเอ็นเอ ตัวอย่างควรมี A260/NS280 อัตราส่วน 1.7-2.0 และ A260/NS230 อัตราส่วนที่มากกว่า 1.5 แต่เนื่องจากความไวของเทคนิคต่างๆ ต่อสารปนเปื้อนเหล่านี้แตกต่างกันไป ค่าเหล่านี้จึงควรใช้เพื่อเป็นแนวทางในความบริสุทธิ์ของตัวอย่างของคุณเท่านั้น

ด้วยวิธีนี้ DNA ดูดซับที่ 280 นาโนเมตรหรือไม่?

อัตราส่วนการดูดกลืนแสงที่260 นาโนเมตร vs 280 นาโนเมตรคือ ที่ใช้กันทั่วไปในการประเมิน ดีเอ็นเอ การปนเปื้อนของสารละลายโปรตีน เนื่องจากโปรตีน (โดยเฉพาะ กรดอะมิโนอะโรมาติก) ดูดซับ แสงที่ 280 นาโนเมตร.

คุณใช้ NanoDrop สำหรับความเข้มข้นของ DNA อย่างไร

โดยทั่วไป นาโนดรอป ให้คุณเลือกได้ ดีเอ็นเอ ,อาร์เอ็นเอ,โปรตีน. ต้องเลือก ดีเอ็นเอ จากนั้นใส่น้ำ 2 ΜL (ต้องการ mili Q) เลือก "ว่าง" หลังจากนั้นใส่น้ำอีก 2 ΜL เพื่อยืนยันว่าการวัดเป็น 0 จากนั้นใส่ตัวอย่างของคุณ 2 ΜL คุณจะได้รับการวัด

แนะนำ: