คุณโหลดเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสอย่างไร?

2024 ผู้เขียน: Miles Stephen | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-15 23:41

กำลังโหลดตัวอย่างและเรียกใช้ Agarose Gel:

1. เพิ่ม กำลังโหลด บัฟเฟอร์ไปยังแต่ละตัวอย่าง DNA ของคุณ
2. เมื่อแข็งตัวแล้วให้วาง agarose เจล เข้าไปใน เจล กล่อง ( อิเล็กโตรโฟรีซิส หน่วย).
3. เติม เจล กล่องที่มี 1xTAE (หรือ TBE) จนกระทั่ง เจล ถูกปกคลุม
4. อย่างระมัดระวัง โหลด บันไดน้ำหนักโมเลกุลเข้าสู่เลนแรกของ เจล .

สำหรับสิ่งนี้ คุณต้องโหลด DNA เท่าใดสำหรับเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส?

ปริมาณของ DNA ที่จะโหลด ต่อหลุมเป็นตัวแปร จำนวนน้อยที่สุดของ ดีเอ็นเอ ที่สามารถตรวจพบได้ด้วยเอธิดัม โบรไมด์ 10 ng. ดีเอ็นเอ ปริมาณมากถึง 100 ng ต่อหลุมจะส่งผลให้แถบที่คมชัดและสะอาดบนเอธิเดียมโบรไมด์ที่เปื้อน เจล.

นอกจากนี้ เหตุใดจึงใช้บัฟเฟอร์ในเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสแทนน้ำ NS กันชน จำเป็นต่อการคงค่า pH ของสารละลาย DNA ให้ใกล้เคียงกับระดับเป็นกลาง เพราะหากสามารถกลายเป็นกรดผ่านอิเล็กโทรไลซิสได้ กระแสไฟฟ้าที่เกิดจากอิเล็กโทรดสามารถทำให้เกิด น้ำ โมเลกุลเพื่อแยกตัวและปล่อย H+ ไอออน

ผู้คนยังถามว่าทำไมจึงใช้เครื่องหมายในเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส?

ชิ้นส่วนที่เล็กกว่าจะเคลื่อนที่เร็วกว่าและไปไกลกว่าชิ้นส่วนที่ใหญ่กว่าขณะที่พวกมันเลื้อยผ่าน เจล . เหตุใดจึงใช้เครื่องหมาย เมื่อเรียกใช้แฟรกเมนต์ผ่าน เจล ? NS เครื่องหมาย มีชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดที่ทราบ เครื่องหมาย ถูกเรียกใช้ในทุก ๆ เจล เพื่อเปรียบเทียบกับเศษที่ไม่รู้จักในที่อื่น เจล เลน

เจลอากาโรสสามารถเห็น DNA ได้มากแค่ไหน?

ที่สุด เจลอากาโรส ทำขึ้นระหว่าง 0.7% ถึง 2% 0.7% เจลจะ แสดงการแยกที่ดี (ความละเอียด) ของขนาดใหญ่ ดีเอ็นเอ เศษ (5–10 kb) และ 2% เจลจะ แสดงความละเอียดที่ดีสำหรับชิ้นส่วนขนาดเล็ก (0.2–1 kb)