การทำ ligation มีค่าใช้จ่ายเท่าไหร่?

2024 ผู้เขียน: Miles Stephen | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-15 23:41

การแปลงร่าง . เพิ่มระหว่าง 1-5 µl ของ ligation ผสมกับเซลล์ที่มีความสามารถสำหรับ การเปลี่ยนแปลง . ขยายเวลา ligation กับ PEG ทำให้ดรอปดาวน์ใน การเปลี่ยนแปลง ประสิทธิภาพ (Quick Ligation ชุด). แนะนำให้ใช้ Electroporation สำหรับโครงสร้างขนาดใหญ่ (>10, 000 bp)

ในที่นี้ ฉันต้องการผลิตภัณฑ์ ligation เท่าใดสำหรับการเปลี่ยนแปลง

การแปลงร่าง . เพิ่มระหว่าง 1-5 µl ของ ligation ผสมกับเซลล์ที่มีความสามารถสำหรับ การเปลี่ยนแปลง . ขยายเวลา ligation กับ PEG ทำให้ดรอปดาวน์ใน การเปลี่ยนแปลง ประสิทธิภาพ (Quick Ligation ชุด). แนะนำให้ใช้ Electroporation สำหรับโครงสร้างขนาดใหญ่ (>10, 000 bp)

ต่อมาคำถามคือ Ligation และ Transform คืออะไร? ในการทดลองโคลนนิ่งโดยทั่วไป นักวิจัยได้ใส่ชิ้นส่วนของ DNA เช่น ยีน เข้าไปใน DNA ทรงกลมที่เรียกว่าพลาสมิด ขั้นตอนนี้ใช้เอ็นไซม์จำกัดและ DNA ligase และเรียกว่า a ligation . หลังจาก ligation ขั้นตอนต่อไปคือการถ่ายโอน DNA ไปเป็นแบคทีเรียในกระบวนการที่เรียกว่า การเปลี่ยนแปลง.

ต่อมาอาจมีคนถามอีกว่า การทำ ligation ต้องใช้ DNA มากน้อยแค่ไหน?

ความเข้มข้นโดยรวมของเวกเตอร์ + เม็ดมีดควรอยู่ระหว่าง 1-10 Μg/ml เพื่อให้มีประสิทธิภาพ ligation . เวกเตอร์:แนะนำให้ใส่อัตราส่วนโมลาร์ระหว่าง 1:1 ถึง 1:10 (ปกติ 1:3) หากคุณไม่แน่ใจใน ดีเอ็นเอ ความเข้มข้น ดำเนินการหลาย ligation ด้วยอัตราส่วนที่แตกต่างกัน

คุณสามารถเก็บปฏิกิริยา ligation ได้นานแค่ไหน?

Ligations สามารถ ทำที่อุณหภูมิห้องหรือเย็นกว่า (คิด 12-16°C) ในชั่วข้ามคืนหรือสองสามวัน ถ้าคุณ ไม่ว่างจริงๆ คุณสามารถ อีกด้วย เก็บ ligation ในตู้เย็นและนำออกมาในภายหลังเพื่อต่อที่อุณหภูมิห้องสำหรับ as ยาว ตามความจำเป็น