วีดีโอ: มี DNA กี่ชุดหลังจาก PCR 10 รอบ
2024 ผู้เขียน: Miles Stephen | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-15 23:41
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR)
จำนวนชิ้น DNA ที่มีเกลียวคู่จะเพิ่มเป็นสองเท่าในแต่ละรอบ ดังนั้นหลังจาก n รอบ คุณจะมีสำเนา DNA 2^n (2 ยกกำลัง n:th) ตัวอย่างเช่น หลังจาก 10 รอบ คุณมี 1024 สำเนา หลังจาก 20 รอบคุณมีประมาณ หนึ่งล้านเล่ม ฯลฯ
ในทำนองเดียวกัน มีคนถาม DNA หลังจากทำ PCR 30 รอบแล้วมี DNA กี่ชุด?
หลังจาก 30 รอบ , สิ่งที่เริ่มเป็นโมเลกุลเดียวของ ดีเอ็นเอ ได้ขยายเป็นกว่าพันล้าน สำเนา (2 30 = 1.02 x 109).
ตัวอย่าง DNA ถูกผลิตขึ้นในเทคนิค PCR จำนวนเท่าใดหลังจากผ่านไป 6 รอบ? หลังจาก เสร็จสิ้นหนึ่ง วงจร , 2 สำเนา เป็น ผลิต จากคนเดียว ดีเอ็นเอ ส่วน หลังจาก เสร็จวินาที วงจร , 22 = 4 สำเนา เป็น ผลิต . ในทำนองเดียวกัน หลังจาก nth วงจร , 22 สำเนา เป็น ผลิต โดยที่ n คือจำนวน รอบ . เพราะฉะนั้น, หลังจาก เสร็จสิ้น 6 รอบ , 2 6 = 64 สำเนา จะ ผลิต.
ในทำนองเดียวกัน ผู้คนถามว่า ต้องใช้เวลากี่รอบในการสร้างสำเนาของส่วนดีเอ็นเอจำนวนหนึ่งพันล้านชุด
จำนวนรอบ โดยทั่วไปจะเป็นกรณีหลังจาก ~ 30 รอบ ใน PCR ที่มี ~105 สำเนาของลำดับเป้าหมายและ Taq DNA polymerase (ประสิทธิภาพ~0.7) ต้องมีอย่างน้อย 25 รอบเพื่อให้ได้ระดับการขยายที่ยอมรับได้ของลำดับเป้าหมายสำเนาเดียวในแม่แบบ DNA ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
คุณคำนวณจำนวนรอบใน PCR ได้อย่างไร?
1 คำตอบ กับทุกรอบของ PCR ตัวอย่างของคุณจะเพิ่มเป็นสองเท่า (ตามอุดมคติ) และคุณพูดถูกเมื่อใช้ 2n for การคำนวณ NS จำนวน ของ DNA ที่ผลิตขึ้น เพียงแทนที่ค่าของ X0 และ Xn - 10ng และ 1000ng คำตอบจะเป็น ~6.64 รอบ.
แนะนำ:
ไพรเมอร์ใน PCR มีหน้าที่อะไร?
ไพรเมอร์ PCR เป็นชิ้นส่วนสั้นๆ ของ DNA สายเดี่ยว (ความยาว 15-30 นิวคลีโอไทด์) ที่ประกอบกับลำดับดีเอ็นเอที่ขนาบข้างบริเวณเป้าหมายที่สนใจ จุดประสงค์ของไพรเมอร์ PCR คือการจัดให้มีกลุ่ม 3'-OH "ฟรี" ซึ่ง DNA polymerase สามารถเพิ่ม dNTP ได้
มีวิธีอื่นในการทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์หรือไม่?
สำหรับการใช้งานที่ต้องการการล้าง PCR หรือการตรวจสอบผลลัพธ์ PCR โดยทั่วไปมีสองวิธีที่ปฏิบัติตาม: การแยกผลิตภัณฑ์ PCR โดยใช้คอลัมน์ และการทำให้เจลบริสุทธิ์จากเจล agarose
วัฏจักร PCR คืออะไร?
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสหรือ PCR เป็นเทคนิคในการทำสำเนาหลายชุดของบริเวณ DNA ที่เฉพาะเจาะจง ในหลอดทดลอง (ในหลอดทดลองแทนที่จะเป็นสิ่งมีชีวิต) ใน PCR ปฏิกิริยาจะถูกหมุนเวียนซ้ำๆ ผ่านการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิหลายชุด ซึ่งทำให้สามารถผลิตสำเนาของพื้นที่เป้าหมายได้จำนวนมาก
จุดประสงค์ของการทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์คืออะไร?
การทำให้ DNA บริสุทธิ์จากปฏิกิริยา PCR โดยทั่วไปมีความจำเป็นสำหรับการใช้งานปลายน้ำ และอำนวยความสะดวกในการกำจัดเอนไซม์ นิวคลีโอไทด์ ไพรเมอร์ และส่วนประกอบบัฟเฟอร์ ตามเนื้อผ้า ทำได้โดยใช้วิธีการสกัดแบบอินทรีย์ เช่น การสกัดฟีนอลคลอโรฟอร์ม ตามด้วยการตกตะกอนของเอทานอล
PCR มีบทบาทอย่างไรในการพิมพ์ DNA?
PCR เป็นเครื่องมือทั่วไปที่ใช้ในห้องปฏิบัติการวิจัยทางการแพทย์และชีวภาพ ใช้ในขั้นตอนแรกของการประมวลผล DNA สำหรับการจัดลำดับ เพื่อตรวจหาการมีหรือไม่มียีนเพื่อช่วยระบุเชื้อโรคในระหว่างการติดเชื้อ และเมื่อสร้างโปรไฟล์ DNA ทางนิติเวชจากตัวอย่าง DNA ขนาดเล็ก