วีดีโอ: มีวิธีอื่นในการทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์หรือไม่?
2024 ผู้เขียน: Miles Stephen | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-15 23:41
สำหรับแอพพลิเคชั่นที่ต้องการ PCR การทำความสะอาดหรือการตรวจสอบของ PCR ผลลัพธ์, ที่นั่น เป็นสอง วิธีการ ปฏิบัติตามโดยทั่วไป: ผลิตภัณฑ์ PCR การแยกโดยใช้เสาและเจล การทำให้บริสุทธิ์ จากเจลอากาโรส
ในที่นี้ โครมาโตกราฟีชนิดใดที่ใช้เพื่อทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์
ในการทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ จะใช้โครมาโตกราฟีแบบแยกขนาด ดักจับโมเลกุลขนาดเล็ก เช่น โปรตีน ไพรเมอร์ และนิวคลีโอไทด์ในขณะที่โมเลกุลขนาดใหญ่เช่นผลิตภัณฑ์ PCR มีขนาดใหญ่เกินไปที่จะป้อนลูกปัดและผ่านคอลัมน์เข้าไปในหลอดรวบรวม
นอกจากนี้ คุณจะชำระ DNA ให้บริสุทธิ์ได้อย่างไร? โดยพื้นฐานแล้ว คุณสามารถ ชำระล้าง ของคุณ ดีเอ็นเอ ตัวอย่างโดยการแยกเซลล์และ/หรือตัวอย่างเนื้อเยื่อของคุณโดยใช้ขั้นตอนที่เหมาะสมที่สุด (การหยุดชะงักทางกลไก การบำบัดทางเคมี หรือการย่อยด้วยเอนไซม์) การแยกกรดนิวคลีอิกออกจากสารปนเปื้อนและตกตะกอนในสารละลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสม
นอกจากนี้ เหตุใดเราจึงทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์
การทำให้บริสุทธิ์ ของ DNA จาก a PCR โดยทั่วไปแล้วปฏิกิริยาจำเป็นสำหรับการใช้ปลายน้ำ และอำนวยความสะดวกในการกำจัดเอ็นไซม์ นิวคลีโอไทด์ ไพรเมอร์ และส่วนประกอบบัฟเฟอร์ วิธีการที่ใช้กันทั่วไปใช้เสาหมุนที่มีซิลิกาเมทริกซ์ซึ่ง DNA สามารถเลือกได้เมื่อมีเกลือ Chaotropic
ทำไมจึงต้องล้าง DNA
เรา ทำความสะอาด ขึ้น ดีเอ็นเอ จากสารละลายที่เป็นน้ำเพื่อขจัดบัฟเฟอร์เกลือ เอนไซม์ หรือสารอื่นๆ ที่อาจส่งผลต่อการใช้งานปลายน้ำ ตัวอย่าง ได้แก่ ปฏิกิริยา PCR ทำความสะอาด ขึ้น, ทำความสะอาด ขึ้นหลังจากการย่อยข้อ จำกัด และ ทำความสะอาด ขึ้นของจีโนมหรือพลาสมิด ดีเอ็นเอ ปนเปื้อนด้วยโปรตีนเซลล์/เศษซาก
แนะนำ:
ไพรเมอร์ใน PCR มีหน้าที่อะไร?
ไพรเมอร์ PCR เป็นชิ้นส่วนสั้นๆ ของ DNA สายเดี่ยว (ความยาว 15-30 นิวคลีโอไทด์) ที่ประกอบกับลำดับดีเอ็นเอที่ขนาบข้างบริเวณเป้าหมายที่สนใจ จุดประสงค์ของไพรเมอร์ PCR คือการจัดให้มีกลุ่ม 3'-OH "ฟรี" ซึ่ง DNA polymerase สามารถเพิ่ม dNTP ได้
มี DNA กี่ชุดหลังจาก PCR 10 รอบ
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) จำนวนชิ้น DNA ที่มีเกลียวคู่จะเพิ่มเป็นสองเท่าในแต่ละรอบ ดังนั้นหลังจาก n รอบ คุณจะมีสำเนาดีเอ็นเอ 2^n (2 ยกกำลัง n:th) ตัวอย่างเช่น หลังจาก 10 รอบ คุณมี 1024 สำเนา หลังจาก 20 รอบ คุณจะมีประมาณหนึ่งล้านเล่ม ฯลฯ
วัฏจักร PCR คืออะไร?
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสหรือ PCR เป็นเทคนิคในการทำสำเนาหลายชุดของบริเวณ DNA ที่เฉพาะเจาะจง ในหลอดทดลอง (ในหลอดทดลองแทนที่จะเป็นสิ่งมีชีวิต) ใน PCR ปฏิกิริยาจะถูกหมุนเวียนซ้ำๆ ผ่านการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิหลายชุด ซึ่งทำให้สามารถผลิตสำเนาของพื้นที่เป้าหมายได้จำนวนมาก
จุดประสงค์ของการทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์คืออะไร?
การทำให้ DNA บริสุทธิ์จากปฏิกิริยา PCR โดยทั่วไปมีความจำเป็นสำหรับการใช้งานปลายน้ำ และอำนวยความสะดวกในการกำจัดเอนไซม์ นิวคลีโอไทด์ ไพรเมอร์ และส่วนประกอบบัฟเฟอร์ ตามเนื้อผ้า ทำได้โดยใช้วิธีการสกัดแบบอินทรีย์ เช่น การสกัดฟีนอลคลอโรฟอร์ม ตามด้วยการตกตะกอนของเอทานอล
รีเอเจนต์ที่จำเป็นสำหรับ PCR คืออะไร และแต่ละรีเอเจนต์มีหน้าที่อะไร?
มีรีเอเจนต์พื้นฐานหรือส่วนผสมห้าชนิดที่ใช้ใน PCR: template DNA, PCR primers, nucleotides, PCR buffer และ Taq polymerase โดยทั่วไปจะใช้ไพรเมอร์เป็นคู่ และ DNA ระหว่างไพรเมอร์ทั้งสองจะถูกขยายระหว่างปฏิกิริยา PCR